In chimica, la diluizione è il processo di riduzione della concentrazione di una sostanza in una soluzione. La diluizione a catena è la diluizione ripetuta di una soluzione per aumentare rapidamente il fattore di diluizione. Questa procedura viene solitamente eseguita in esperimenti che richiedono soluzioni molto diluite con elevata precisione. Ad esempio esperimenti che coinvolgono curve di concentrazione su scala logaritmica o esperimenti per determinare la densità dei batteri. Le diluizioni a catena sono ampiamente utilizzate in esperimenti scientifici come biochimica, microbiologia, farmacologia e fisica.
Fare un passo
Metodo 1 di 2: Esecuzione della diluizione di base
Passaggio 1. Determinare la soluzione diluente appropriata
È molto importante determinare il liquido da utilizzare per la diluizione. Molte soluzioni sono solubili in acqua distillata, ma non è sempre così. Se stai diluendo batteri o altre cellule, fallo su un terreno di coltura. Il liquido scelto verrà utilizzato per tutte le diluizioni della catena.
In caso di dubbi su quale diluente utilizzare, chiedere aiuto o cercare online. Cerca esempi di altri che hanno fatto diluizioni a catena simili
Passaggio 2. Preparare una serie di provette contenenti 9 ml di diluente
Le provette vengono utilizzate per le diluizioni vuote. Per prima cosa, inserire il campione non diluito nella prima provetta, quindi eseguire le diluizioni in successione alle provette successive.
- Etichetta tutte le provette utilizzate prima di iniziare la diluizione in modo da non confonderti una volta che l'esperimento è in esecuzione.
- Ogni provetta sarà riempita con 10 diluizioni, partendo dalla provetta la cui sostanza non è stata diluita. La diluizione nella prima provetta è 1:10, seguita da 1:100 nella seconda provetta, 1:1000 per la terza e così via. Determinare la quantità di diluizione che deve essere eseguita in anticipo, in modo da non sprecare la soluzione diluente.
Passaggio 3. Preparare una provetta contenente almeno 2 ml di soluzione non diluita
La quantità minima di soluzione da diluire richiesta per eseguire questa diluizione a catena è 1 ml. Se usi solo 1 ml, non rimarrà alcuna soluzione non diluita. Etichetta BLM per soluzioni non diluite.
Mescolare accuratamente la soluzione prima di iniziare qualsiasi diluizione
Passaggio 4. Eseguire la prima diluizione
Prelevare 1 ml della soluzione non diluita dalla provetta BLM con una pipetta e metterlo in una provetta etichettata 1:10 contenente 9 ml di diluente, quindi miscelare accuratamente. Ora c'è 1 mL della soluzione non diluita in 9 mL del diluente. Pertanto, la soluzione è stata diluita di un fattore di diluizione di 10.
Passaggio 5. Eseguire la seconda diluizione
Per la seconda diluizione, prelevare 1 ml di soluzione dalla provetta 1:10, quindi versarla nella provetta 1:100 che contiene anche 9 ml di diluente. Assicurati che la soluzione nella provetta 1:10 sia completamente miscelata prima di aggiungerla alla provetta successiva. Ancora una volta, assicurati che la diluizione nella provetta 1:100 sia completamente miscelata. La soluzione della provetta 1:10 è stata diluita 10 volte nella provetta 1:100.
Passaggio 6. Continuare questa procedura per eseguire diluizioni a catena più lunga
Questo processo può essere ripetuto tutte le volte necessarie per ottenere la concentrazione di soluzione desiderata. Negli esperimenti che utilizzano curve di concentrazione, è possibile eseguire diluizioni a catena per produrre un numero di soluzioni con diluizioni di 1, 1:10, 1:100, 1:1.000.
Metodo 2 di 2: Calcolo del fattore di diluizione e della concentrazione finale
Passaggio 1. Calcolare il rapporto dell'ultima diluizione nella diluizione a catena
Il rapporto di diluizione totale può essere determinato moltiplicando il fattore di diluizione da ogni passaggio al passaggio finale. L'illustrazione matematica è con la formula DT = D1 x D2 x D3 x … x D , DT è il fattore di diluizione totale e D è il rapporto diluente.
- Ad esempio, supponiamo di eseguire una diluizione 1:10 4 volte. Inserisci il fattore diluente nella formula: DT = 10 x 10 x 10 x 10 = 10.000
- Il fattore diluente nella quarta provetta in questa diluizione a catena è 1:10,000. La concentrazione della sostanza dopo la diluizione è 10.000 volte inferiore rispetto a prima della diluizione.
Passaggio 2. Determinare la concentrazione della soluzione dopo la diluizione
Per determinare la concentrazione finale di una soluzione dopo una diluizione a catena, è necessario conoscerne la concentrazione iniziale. La formula è Cfine = Cinizio/D, Cfine è la concentrazione finale della soluzione diluita, Cinizio è la concentrazione iniziale della soluzione originale e D è il rapporto di diluizione predeterminato.
- Ad esempio: se inizi con una soluzione cellulare la cui concentrazione è 1.000.000 di cellule per ml e il rapporto di diluizione è 1.000, qual è la concentrazione finale del campione diluito?
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Utilizzando la formula:
- Cfine = Cinizio/D
- Cfine = 1.000.000/1.000
- Cfine = 1000 cellule per ml.
Passaggio 3. Assicurati che tutte le unità siano le stesse
Quando si esegue un calcolo, assicurarsi che le unità siano sempre le stesse alla fine del calcolo. Se l'unità iniziale è cellule per ml, assicurati che le unità rimangano le stesse alla fine del calcolo. Se la concentrazione iniziale è parti per milione (bpd), anche la concentrazione finale deve essere in unità bpj.
